Инновационная технология в диагностике хронического гепатита В.

Хронический гепатит В является одной из основных этиологических причин печеночной недостаточности, цирроза и гепатоцеллюлярной карциномы во всем мире. Это состояние не может быть полностью вылечено имеющимися в настоящее время лекарствами из-за постоянного существования кольцевой ковалентно замкнутой ДНК (кзкДНК) вируса гепатита В (ВГВ) в инфицированных гепатоцитах, которая является матрицей для транскрипции РНК ВГВ. Поскольку количественная оценка кзкДНК сама по себе требует инвазивной процедуры (биопсии печени), необходимы сывороточные биомаркеры, отражающие внутрипеченочную активность кзкДНК. В последнее время все больше исследований показывают, что циркулирующая РНК ВГВ может служить сывороточным биомаркером инфекции, лечения и прогноза ВГВ. Сывороточная РНК транскрибируется непосредственно с кзкДНК, поэтому уровни сывороточной РНК могут указывать на присутствие транскрипционной активности вируса.

Уровни РНК HBV коррелируют с уровнями ДНК HBV и связаны с уровнями HBsAg и ALT в сыворотке. Уровни РНК HBV варьируются в зависимости от фазы инфекции — они самые высокие в фазе иммунотолерантности и самые низкие у пациентов с неактивной инфекцией HBV. У пациентов, получающих лечение аналогами нуклиазидов (основная группа лекарственных препаратов, используемых для лечения хронического вирусного гепатита В) уровни РНК HBV выше, чем уровни ДНК HBV.

В целом РНК ВГВ в сыворотке указывают на транскрипционную активность кзкДНК. Этот биомаркер (в сочетании с ДНК HBV и уровнем HBsAg) можно использовать для мониторинга ответа на лечение у пациентов, получающих терапию аналогами нуклиазидов. Его также можно использовать для выявления пациентов, которые могут безопасно прекратить прием аналогов нуклиазидов и/или достичь исчезновения HBsAg (функциональное излечение). Серийная оценка внутрипеченочной кзкДНК ВГВ невозможна, поэтому для определения активности кзкДНК можно использовать измерение РНК ВГВ вместе с анализом вирусной активности, особенно при разрабатываемых методах лечения, направленных на элиминацию и/или функциональное излечение.

Компания «ROSSA» разработала набор реагентов «ROSSAmed HBV—RNA» для выявления РНК вируса Гепатита В, методом полимеразной цепной реакции в режиме реального времени. Набор подходит для приборов планшетного типа: «ДТпрайм», «ДТлайт», «ДТ-96» (ООО «НПО ДНК-Технология»), или CFX96 (Bio-Rad), qTOWER (Analytik Jena), а также для детектирующего амплификатора роторного типа, например, Rotor-Gene Q (QIAGEN).

Набор «ROSSAmed HBV- RNA» прошел испытания в референс-лаборатории НИИ Вирусологии М.З. РУз, а также получил регистрационное удостоверение «Государственого центра экспертизы и стандартизации лекарственных средств, изделий медицинского назначения и медицинской техники» Республики Узбекистан. Комплект набора получил положительные заключения и был рекомендован к использованию в лабораторной практике. Аналогов набора «ROSSAmed HBV- RNA» на данный момент в Узбекистане не существует.

Рекомендуемая система для выделения РНК/ДНК из биологического материала – «MagSorb Plasma» (производства компании OOO «ROSSA»).