Главным отличием набора реагентов «ROSSАmed COVID-19 ISOTHERM» от других наборов для ПЦР, является выявление РНК вируса методом колориметрической, петлевой, изотермальной амплификации. В отличие от метода ПЦР, амплификация РНК происходит при постоянной температуре реакционной смеси, а также с использованием более производительных ферментов, что позволяет сократить время проведения анализа в несколько раз, снижает риск ошибок за счет минимального количества операций. Все что вам необходимо - прогреть образец при 95℃ -15 минут (фермент устойчив к ингибированию, вследствие чего не требуется этап выделения и очистки РНК), приготовить реакционную смесь, добавить в нее образец, инкубировать при 65℃ - 45 минут. В общей сложности экспресс-тестирование занимает 1 час.
«ROSSАmed COVID-19 ISOTHERM» прошел клинико-лабораторные испытания в НИИ Вирусологии, в ходе которых проводилось сравнение набора реагентов с ПЦР тест-системами в режиме «реального времени» российских производителей. В испытания были включены положительные образцы с низкой и высокой концентрацией вируса, а также отрицательные образцы. Совпадения выявлены в 96,1% случаев при тестировании положительных образцов, включающие в себя образцы с низкой концентрацией вируса, и в 100% случаев при тестировании отрицательных образцов.
ПЦР долгие годы являлась основным метод амплификации нуклеиновых кислот, но современные подходы к молекулярной диагностике требуют более простых и быстрых способов получения результатов ПЦР. Набор реагентов «ROSSАmed COVID-19 ISOTHERM», предназначенный для выявления и идентификации специфических фрагментов РНК коронавируса SARS-CoV-2, использует инновационный метод колориметрической, изотермальной, петлевой амплификации проб.
Принцип метода
Метод изотермальной петлевой амплификации основан на синтезе нуклеиновых кислот с вытеснением цепи, катализируемой Bst-ДНК-полимеразой.Используемый фермент позволяет проводить этап синтеза кДНК одновременно с амплификацией. Процесс амплификации можно разделить на три основных этапа: 1) образование базовой гантелеобразной структуры, 2) этап циклической амплификации, 3) этап элонгации и повторения циклов. В результате такой реакции образуется множество конкатемеров инвертированных повторов целевого фрагмента, формирующих в пространстве структуры, похожие на цветную капусту (cauliflower-like structures). В смесь добавлен краситель чувствительный к рН среды, продукты амплификации смещают рН среды в кислую сторону, что приводит к изменению цвета смеси, что можно детектировать невооруженным глазом.
Получение результатов
Время проведения анализа -1 час. Регистрация результатов осуществляется визуально.
Результат
Положительный Отрицательный
Особенности
Среди отличительных особенностей метода можно отметить быстрое накопление продуктов реакции, низкую чувствительность к примесям, высокую специфичность.
Скачать инструкцию